激光共聚焦显微镜的样品制备原则介绍

激光共聚焦电子显微镜检测前的关键技术步骤就是进行样品制备。样品需要用不同的单，双和三类的荧光探针标记。标本可以是固定的或活着的组织或附着培养物。细胞应培养在共聚焦特殊碟或盖，悬浮细胞，萼片或滴，并盖玻片。

样品的Z大不同厚度约1~2mm，盖玻片厚度应小于0.17mm，滑块厚度一般应在0.8~1.2mm之间，表面要光滑，厚度要均匀，没有一个明显的干扰荧光。固定标准样品通常用密封片密封，通常需要使用企业通过研究使用pH 8.5-9的PBS制备的甘油密封。

常规样品制备要求

⒈染料的选择

由于激光共聚焦显微镜采用单波长激光作为光源，荧光染料的选择应以激光共聚焦显微镜的激光波长为基础。 如果同一样品中有多个荧光染料，尽可能考虑它们的发射波长。 不要重叠，避免交叉颜色问题。

⒉样品载体的选择

一般的激光共焦显微镜高倍物镜是一种油镜。其数值不同孔径小，镜片与样品数据之间的工作时间距离不大于0.17mm。因此，如果观察分析样品是粘附细胞或组织网络切片，则可以使用一个普通用户负荷，滑盖玻璃就可以了。对于悬浮的细胞或颗粒，可以通过在激光共聚焦显微镜的培养皿中携带样本来观察。

⒊密封片的选择

如果仅需要进行观察分析样品一次并且我们不太容易淬灭荧光，则可以使用具有一定浓度的甘油混合物来密封膜。如果一个样品需要放置一段发展时间并且样品需要经过多次使用，则应使用抗荧光淬火密封来减少荧光信号损失。